1.紫外分光光度計工作原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同。因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
又因為許多物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對這些物質(zhì)分別進行測定(定量分析和定性分析)。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。當(dāng)入射光波長一定時，溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數(shù)。
首先確定實驗條件，并在此條件下測得標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸收峰以及其對應(yīng)波長值(同時可獲得該物質(zhì)的大吸收波長)；再在選定的波長范圍內(nèi)(或大波長值處)，分別以(不同濃度)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標(biāo)繪出化合物溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到其所對應(yīng)的數(shù)學(xué)方程；接著在相同實驗條件下配制待測溶液，測得待測溶液的吸光度，后用已獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量。
凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機化合物，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。
2.常見類型
紫外可見分光光度計
技術(shù)指標(biāo)
波長范圍：190-900nm
光譜帶寬：1.0
波長準(zhǔn)確度：±0.1nm(D2656.1nm)，±0.3nm全區(qū)域
波長重復(fù)性：≤0.1nm
雜散光：≤0.03%T
光度準(zhǔn)確度：±0.2%T
光度重復(fù)性：0.1%T
穩(wěn)定性：0.0004A/h(500nm處)
基線平直度：±0.001A
數(shù)據(jù)輸出：USB接口
打印輸出：并行口
光度顯示范圍：0-200%T、-4-4A、0-9999C(0-9999F)
顯示系統(tǒng)：320*240位點陣高亮背光大屏幕LCD液晶顯示器
軟件：標(biāo)配
燈源：進口氘燈、鎢燈
接收器：進口硅光二極管
外形尺寸：460*380*220mm
重量：20kg
儀器特點
1、320*240位點陣高質(zhì)量大屏幕液晶顯示器，顯示清晰，信息完備，充分考慮人性化設(shè)計
2、強大的數(shù)據(jù)處理功能，使實驗結(jié)果能得到充分的應(yīng)用，使用戶編輯更為簡單快捷
3、主要元件采用進口配置，使精度更高、速度更快、可靠性更強、兼容性更廣、自動化程度更高
4、豐富的應(yīng)用功能，使用戶隨心所欲，應(yīng)用更靈活、開放，使分光光度計的應(yīng)用領(lǐng)域得到了極大的拓展
5、高自動化程度，使維護方便、操作簡便、效率更高
大屏幕液晶LCD主機顯示功能
光度測量：選定波長下吸光度、透過率、濃度的測試
定量測量：標(biāo)準(zhǔn)曲線法、系數(shù)法、單波長法、雙波長法、多波長法
光譜掃描：多樣品進行全波段掃描，找出大吸收峰值
動力學(xué)測試：選定波長下測試樣品濃度隨時間的變化趨勢
多波長測試：自由選定多個波長，自動測出樣品在多個波長下的吸光度和透過率值
DNA/蛋白質(zhì)測試：測試DNA/蛋白質(zhì)的濃度和比率
自動功能：波長誤差的自動修復(fù)、濾光片切換的自動定位、氘燈和鎢燈的自動切換
其他功能：光譜導(dǎo)數(shù)、光譜平滑、數(shù)據(jù)導(dǎo)出、燈源自動控制、支持自動樣品池架及其它附件、配有數(shù)據(jù)口可實現(xiàn)聯(lián)機操作、數(shù)據(jù)存儲和調(diào)用、斷電保持和系統(tǒng)應(yīng)用功能豐富的掃描軟件功能：光度分析、定量分析、光譜分析、動力學(xué)分析、多波長測試、DNA/蛋白質(zhì)測試、系統(tǒng)應(yīng)用。
3.校正方法
紫外分光光度計的校正方法：分光光度法的重要的一個物理化學(xué)量是吸光度。為了獲得準(zhǔn)確的研究結(jié)果，準(zhǔn)確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結(jié)果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度，可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結(jié)果的準(zhǔn)確度，可在大體相同實驗條件下，用比較一種物質(zhì)的準(zhǔn)確測量結(jié)果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。而分光光度計的系統(tǒng)誤差(波長校正、分光光度計的慢散光、放大器的線性響應(yīng)、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數(shù)、操作者的改變、使用物質(zhì)的純度、稱量和濃度、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數(shù)情況下，通過嚴(yán)格按操作程序測量、儀器調(diào)零、準(zhǔn)確稱量等來控制或減少這種誤差的產(chǎn)生。關(guān)于儀器的系統(tǒng)誤差，可通過對分光光度計的定期校正來克服，若所需準(zhǔn)確度很高的測量，則必須天天校正。
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